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電泳加工的另一種--瓊脂糖凝膠電泳
發(fā)布時(shí)間:2019-06-22 點(diǎn)擊次數(shù):次
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)(起決定作用的物質(zhì))的一種電泳方法。電泳廠家?guī)щ婎w粒在電場(chǎng)作用下,向著與其電性相反的電極移動(dòng),稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子在電場(chǎng)中移動(dòng)速度不同而達(dá)到分離的技術(shù)稱為電泳技術(shù)。陰極電泳根據(jù)被涂物的極性和電泳涂料的種類,電泳涂裝法可分為兩種,陰極電泳涂裝法被涂物為陰極,所采用的電泳涂料是陽(yáng)離子型(帶正電荷)。其分析(Analyse)原理與其他支持物電泳主要區(qū)別是:它兼有 ;分子篩 ;和 ;電泳 ;的雙重作用. 一般的核酸檢測(cè)(檢查并測(cè)試)只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是只有幾個(gè)bp的差別應(yīng)該選擇(xuanze)聚丙烯酰胺(acylamide)凝膠電泳;用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應(yīng)該使用脈沖凝膠電泳。注意(attention)巨大的DNA鏈用普通電泳可能(maybe)跑不出膠孔導(dǎo)致(cause)缺帶。瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。對(duì)于分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔徑(aperture)較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。這是我做病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)(experiment)試劑盒的說(shuō)明書(shū)部分,看是否對(duì)你有幫助:配制1%的膠進(jìn)行電泳1 稱取0.4g瓊脂糖放于錐形(taper)瓶中,再量取40ml的0.5×TBE溶液混合,放于微波爐中煮沸,至溶液清徹透明為止,大約需1分40秒。2 冷卻到60℃時(shí)(放于掌心,能感覺(jué)到湯但又能忍受。)加2μl核酸染料,搖勻。3 組合安裝好制膠器,并調(diào)至水平。將膠倒于制膠器中,插好梳子。待40分鐘膠冷卻凝固(solidification)后,就可放于倒好電泳緩沖液的電泳槽中進(jìn)行點(diǎn)樣。4 取5-10μl樣品溶液,加1-2μl 6×loading Dye,混合均勻(jūn yún)后進(jìn)行點(diǎn)樣。每排點(diǎn)樣孔突出點(diǎn)一個(gè)5μl的Marker。5 點(diǎn)完后,調(diào)電泳儀各參數(shù)(parameter)進(jìn)行電泳:U:80V;A;200A;T:40min。做實(shí)驗(yàn)需要注意的一點(diǎn)就是要戴手套操作控制,保護(hù)好自己。像如果用的核酸染料是EB、緩沖液是TAE的話,就要更加小心了,那玩意兒致癌性比較強(qiáng);像我們用的是GoldViewTM 核酸染料和TAE還不是特別要緊還有就是,這里說(shuō)的40ml制的一般都是25孔的中膠,你要根據(jù)所需要的孔數(shù)來(lái)按比例調(diào)節(jié)用量。黑色電泳隨著汽車工業(yè)的發(fā)展,先進(jìn)的汽車涂裝特別是轎車涂裝技術(shù)和設(shè)備在我國(guó)得以快速應(yīng)用。目前,在我國(guó)安裝的涂裝設(shè)備的水平已經(jīng)有了很大進(jìn)步,今后隨著水性漆及粉末涂料等環(huán)保涂料的使用,我國(guó)的涂裝技術(shù)水平將整體達(dá)到世界先進(jìn)水平。膠不能制的太厚或者太薄,二者都不利于電泳的。煮膠的時(shí)候,一定要讓膠完全溶合(拿起來(lái)對(duì)著光照看,沒(méi)有亮亮的小點(diǎn)出現(xiàn)),不然跑出來(lái)的膠不好看;煮的時(shí)間也不能太長(zhǎng),煮久了對(duì)樣品的回收這類的可能(maybe)有影響(influence)的。
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